Fluo-3, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級(jí)純

zui常用的Ca²⁺綠色熒光探針

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Fluo-3 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光探針，超級(jí)純；Fluo-3, Acetoxymethyl Ester; 可見(jiàn)光激發(fā)波長(zhǎng)Ca²⁺熒光探針；Fluo-4；Fluo-8, AM；Rhod-2, AM；CAS NO：121714-22-5；

Fluo-3是一種常用的可見(jiàn)光激發(fā)波長(zhǎng)Ca²⁺熒光探針，具有較高的Ca²⁺捕獲能力，通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化直接反映Ca²⁺信號(hào)的動(dòng)力學(xué)變化。當(dāng)Fluo-3以游離配體形式存在時(shí)幾乎是非熒光性的，但一旦與Ca²⁺結(jié)合即可產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光，熒光信號(hào)增強(qiáng)60~80倍，此時(shí)的zui大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm，zui大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。可通過(guò)激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)胞內(nèi)鈣離子水平的變化。Fluo-3, AM是Fluo-3的一種乙酰甲酯衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，只需簡(jiǎn)單培養(yǎng)，即可輕易進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，即被其內(nèi)酯酶剪切生成不具膜滲透性的Fluo-3，從而滯留在胞內(nèi)以發(fā)揮相應(yīng)生理功能。

可見(jiàn)光激發(fā)Ca²⁺熒光探針的優(yōu)勢(shì)：

與紫外光激發(fā)的熒光探針相比，如Fura-2和Indo-1，可見(jiàn)光激發(fā)Ca²⁺探針具有以下特點(diǎn)：

1）適用于大多數(shù)的激光共聚焦測(cè)鈣系統(tǒng)，包括共聚焦激發(fā)掃描顯微鏡以及流式細(xì)胞儀等。

2） 具有更強(qiáng)的染料吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測(cè)Ca²⁺變化，從而降低對(duì)活細(xì)胞的光毒性。

3）Ca²⁺依賴性熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，對(duì)Ca²⁺變化水平檢測(cè)敏感度更高。

4）降低樣品自熒光以及光散射的干擾。

5）兼容光激活探針以及UV-激發(fā)試劑，因此更方便于多參數(shù)檢測(cè)。

6）無(wú)光譜偏移。

Fluo-3, AM的應(yīng)用：

Fluo-3自1989年發(fā)現(xiàn)之后，其成像技術(shù)常用來(lái)揭示鈣離子信號(hào)傳遞內(nèi)許多元素發(fā)展過(guò)程的空間動(dòng)力學(xué)。還能被廣泛用在流式分析，比如籠鎖Ca²⁺螯合劑光活化、第二信使、神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)研究以及細(xì)胞水平的藥物篩選實(shí)驗(yàn)。

Fluo-3, AM的應(yīng)用實(shí)例：

Fig. 2， Metal-ion response screening for fluo-3. The maximum relative fluorescence intensity was measured for identical indicator concentrations in solutions containing 10 mM EGTA + 10 µM TPEN, 1 µM ion (100 µM for Mg²⁺) and 100 µM ion (10 mM for Mg²⁺). Results are plotted as fluorescence changes relative to the ion-free (10 mM EGTA + 10 µM TPEN) reference solution expressed as (F-Fo)/Fo, where F is the fluorescence intensity of ion-containing solutions and Fo is the fluorescence intensity of the reference solution. Blue bars indicate the response to 1 µM ion (100 µM for Mg²⁺), and red bars indicate the response to 100 µM ion (10 mM for Mg²⁺).

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